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操作步驟

1. 開(kāi)機(jī)：打開(kāi)開(kāi)關(guān)，視窗上顯示“SELF TEST”，顯示 10 秒中后，顯示 RUN-ENTER 菜單：準(zhǔn)備執(zhí)行程序。
2. 放入樣本管，關(guān)緊蓋子。

程序輸入與選擇

1. 如果要運(yùn)行已經(jīng)編好的程序，則直接按《Proceed》，用箭頭鍵選擇已儲(chǔ)存的程序，按《Proceed》，則屏幕顯示：按《Proceed》選擇 ENABLE，則開(kāi)始執(zhí)行程序。
2. 輸入新的程序：在 RUN-ENTER 菜單上用箭頭鍵選擇 ENTER PROGRAM，按《Proceed》選擇 NEW，命名新的程序，zui多 8 個(gè)字母，輸入后按《Proceed》確認(rèn)(如何輸入字母、數(shù)字)；輸入程序步驟：名字輸入后，顯示，按《Proceed》則可以輸入溫度(0～100℃)，按《Proceed》確認(rèn)后，則可以輸入孵育時(shí)間，用《Select》鍵移動(dòng)光標(biāo)，輸入數(shù)字，完成后按《Proceed》確認(rèn)，跳到下一步，輸入方式同上；選擇 GOTO，輸入循環(huán)步驟時(shí)鏈接到第幾步(循環(huán)數(shù)zui多可達(dá) 9999次)(為實(shí)際循環(huán)數(shù)-1)。選擇 option,顯示：再選擇 increment,按《Proceed》確認(rèn)，輸入初始的溫度，確認(rèn)后輸入時(shí)間，按《Proceed》確認(rèn)，然后輸入每個(gè)循環(huán)增加或減少的溫度，增加用正值，減少用負(fù)值(-0.1℃～6℃)，按《Proceed》確認(rèn)。選擇 extend，按《Proceed》確認(rèn),輸入每個(gè)循環(huán)增加或減少的時(shí)間(-60～60 秒)，按《Proceed》確認(rèn)；選擇 slop(指溫度上升或下降的速率),輸入溫度的改變值(-0.1～1.5℃)按《Proceed》確認(rèn)，然后輸入加熱或致冷的速度，按《Proceed》確認(rèn)；選擇 End，輸入結(jié)束步驟。
3. 輸入完成的程序后，到 RUN-ENTER 菜單，選擇新程序，開(kāi)始運(yùn)行。
4. 其它：用《pause》可以暫停一個(gè)運(yùn)行的程序，再按一次繼續(xù)程序；用《stop》或《Cancel》可停止運(yùn)行的程序。
5. 編輯程序：可以用《Cancel》鍵刪除輸錯(cuò)的值，輸入新的值后按《Proceed》確認(rèn)。對(duì)于未輸完的程序，要先輸入 END，按《Proceed》將程序儲(chǔ)存后才能刪除。刪除已經(jīng)儲(chǔ)存的程序：從 RUN-ENTER 菜單中選擇 RUN-PROGRAM，按《Proceed》，顯示主菜單，選擇 DELET,用《Select》選擇刪除。查看程序的步驟：在主菜單上選擇 LIST，按《Proceed》，用《Select》將選擇名稱，再按《Proceed》，顯示程序的*步，用《Select》鍵向前、向后翻頁(yè)查看，此時(shí)不能改變程序的值。
6. 編輯已有的程序：從 RUN-ENTER 菜 單 中 選 擇 RUN-PROGRAM ， 按《Proceed》，顯示主菜單，選擇 EDIT，按《Proceed》確認(rèn)，用《Select》鍵選擇要編輯的程序，按《Proceed》顯示程序的*步。用《Select》鍵將光標(biāo)移到要改變的溫度或循環(huán)的值上，鍵入新值，按《Proceed》確認(rèn)，按《Cancel》刪除鍵入的值，出現(xiàn)空格，鍵入新值后確認(rèn)。注：一旦值被改變或刪除，原來(lái)的值不能恢復(fù)，必須重新鍵入。編輯時(shí)間值：必須重新鍵入小時(shí)、分鐘、秒，按《Proceed》。

PCR 體系設(shè)置

1. 預(yù)變性：可用 94～95℃，2～10min,一般用 5min。
2. 變性：一般用 94℃，30s~2min,一般 45s~1min。
3. 退火：溫度自定，30s~2min。
4. 延伸：70～75℃，一般 72℃，對(duì)于<2kb,<1min;>2kb,每增加1kb 加 1min。
5. 循環(huán)數(shù)：一般 25～35 個(gè)循環(huán)。
6. zui終延伸：72℃，5～15min。
7. 保存：10℃，時(shí)間設(shè)為 0。
8. END。

PCR 儀使用中的一些小技巧

1. 仔細(xì)閱讀儀器使用說(shuō)明書(shū)，這樣可以充分發(fā)揮儀器的性能并避免發(fā)生錯(cuò)誤。
2. 程序設(shè)計(jì)完成后，一定要仔細(xì)檢查，以免出錯(cuò)造成損失。
3. 常用的程序調(diào)用以前使用過(guò)的正確程序文件；樣品量較小時(shí)，在樣品槽的兩邊各加上兩排 8 聯(lián)管，這樣可使熱蓋平整，加熱效果好，有利于效果的穩(wěn)定性。
4. 在進(jìn)行各種試劑加樣時(shí)，相同的試劑要一起加后再分裝，要用同一只吸液器及同一個(gè)槍頭。
5. 加樣完成后，用酶聯(lián)板離心轉(zhuǎn)頭將管離心一下，使反應(yīng)液到管底，因?yàn)榉磻?yīng)液在管壁或管蓋上時(shí)，會(huì)嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

PCR 儀的清洗

1. 樣品池的清洗：先打開(kāi)蓋子，然后用 95%乙醇或 10%清洗液浸泡樣品池 5min，然后清洗被污染的孔;用微量移液器吸取液體，用棉簽吸干剩余液體；打開(kāi) PCR 儀，設(shè)定保持溫度為 50℃ 的 PCR 程序并使之運(yùn)行，讓殘余液體揮發(fā)去除。一般 5～10min 即可。
2. 熱蓋的清洗：對(duì)于熒光定量 PCR 儀，當(dāng)有熒光污染出現(xiàn)，而且這一污染并非來(lái)自樣品池時(shí)，或當(dāng)有污染或殘跡物影響到熱蓋的松緊時(shí)，需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底面，確保樣品池的孔干凈，無(wú)污物阻擋光路。
3. 儀器外表面的清洗：清洗儀器的外表面可以除去灰塵和油脂，但達(dá)不到消毒的效果。選擇沒(méi)有腐蝕性的清洗劑對(duì) PCR 儀的外表面進(jìn)行清洗。
4. 更換保險(xiǎn)絲：先將 PCR 儀關(guān)機(jī)，拔去插頭，打開(kāi)電源插口旁邊的保險(xiǎn)盒，換上備用的保險(xiǎn)絲，觀察是否恢復(fù)正常。

PCR 儀的維護(hù)

1. PCR 儀器需要定期檢測(cè)，視制冷方式而定一般半年至少一次。
2. PCR 反應(yīng)的要求溫度與實(shí)際分布的反應(yīng)溫度是不一致的，當(dāng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)各孔平均溫度差偏離設(shè)置溫度大于 1～2℃時(shí)，可以運(yùn)用溫度修正法糾正 PCR 實(shí)際反應(yīng)溫度差。
3. PCR 反應(yīng)過(guò)程的關(guān)鍵是升、降溫過(guò)程的時(shí)間控制，要求越短越好，當(dāng) PCR 儀的降溫過(guò)程超過(guò) 60s，就應(yīng)該檢查儀器的制冷系統(tǒng)，對(duì)風(fēng)冷制冷的 PCR 儀要較*地清理反應(yīng)底座的灰塵;對(duì)其他制冷系統(tǒng)應(yīng)檢查相關(guān)的制冷部件。
4. 一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時(shí)，不要輕易打開(kāi)或調(diào)整儀器的電子控制部件，必要時(shí)要請(qǐng)專業(yè)人員修理或利用儀器電子線路詳細(xì)圖紙進(jìn)行維修。??