將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時,可殺死支原體,但對細胞有不良影響。所以在處理前要進行預試驗,摸索能大限度殺死支原體又對細胞影響小的加熱時間。此法有時不可靠。若先用藥物處理后,再以41℃加溫處理效果更佳。
用5%的兔支原體免疫血清(血凝效價1:320以上)可去除支原體污染,因特異抗體可抑制支原體生長,故經(jīng)抗血清處理后11天即轉為陰性,并且5個月后仍為陰性。但此法比較麻煩,不如用抗生素方便、經(jīng)濟。
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除了上述去除污染的方法外,還有動物體內(nèi)接種除菌法、巨噬細胞吞噬法、污染培養(yǎng)瓶中加溴尿嘧啶再用光照射的方法及過濾法等,但均較麻煩,且效果不確定。所以一旦支原體污染,除非有特別重要價值,一般均棄之重新培養(yǎng)。
二、污染的預防
預防是防止細胞培養(yǎng)過程中發(fā)生污染的辦法。只有預防工作做在前,才能將發(fā)生污染的可能性降到小程度。一般預防可從以下幾方面著手:
(一)從物品、用品消毒滅菌著手
細胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要*,各種溶液滅菌除菌要仔細,并在無菌試驗陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔消毒滅菌。
(二)從操作者做起
1、細胞培養(yǎng)操作者責任心要強,要細心穩(wěn)重,操作技術要熟練。進無菌室前要用肥皂洗手或用5%新潔爾滅浸泡5分鐘,按規(guī)定穿隔離衣。進入后關好門,坐下來盡量少走動。工作開始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。事先要嚴格檢查器材、溶液和培養(yǎng)物,不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無菌室內(nèi),更不能隨便使用,以免造成大批污染。
2、操作者動作要輕,必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)打開瓶口,并將瓶口轉動燒灼。操作時盡量不要談話,若打噴嚏或咳嗽應轉向背面。
3、操作時要常更換吸管,切勿一根吸管做到底。一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應棄去。實驗完畢及時收拾,保持實驗室清潔整齊,后用消毒水浸泡的紗布擦臺面。
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在進行多種細胞培養(yǎng)操作時,所用器具要嚴格區(qū)分,做上標記便于辨別。并按順序進行操作,避免一起進行時易發(fā)生混亂。
在進行換液或傳代操作時,注射器和滴管不要觸及細胞培養(yǎng)瓶瓶口,以免把細胞帶到培養(yǎng)液中污染其他細胞。
細胞培養(yǎng)所有細胞一旦購置,或從別處引入,或自己建立,均應及早留種凍存,一旦發(fā)生污染可棄之復蘇,重新培養(yǎng)。