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細(xì)菌培養(yǎng)皿是如何正確培養(yǎng)細(xì)胞的?
  • 發(fā)布日期:2020-09-14      瀏覽次數(shù):2499
    •   一、 復(fù)蘇
        1. 把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
        2. 把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來),1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
        3. 把上清液倒掉,加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm細(xì)菌培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動,使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。
        4. 標(biāo)好細(xì)胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等,放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。
        5. 3天換一次培養(yǎng)基。
        二、 傳代
        1. 細(xì)菌培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時要傳代。
        2. 把原有培養(yǎng)基吸掉。
        3. 加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌福芨采w細(xì)胞就行),消化1-2分鐘。
        4. 細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
        5. 用移液槍吹打細(xì)胞,把細(xì)胞都懸浮起來。
        6. 把細(xì)胞吸到15ml的離心管中,1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
        7. 倒掉上清液,加1-2ml培養(yǎng)基,把細(xì)胞都吹起來。
        8. 根據(jù)細(xì)胞種類把細(xì)胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般,癌細(xì)胞分5個,正常細(xì)胞傳3個。繼續(xù)培養(yǎng)。
        三、  凍存
        把細(xì)胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫明細(xì)胞種類,凍存日期。4℃ 30min,-20℃ 30min,-80℃過夜,然后放到液氮灌中保存。
        凍存液的配制: 70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。要注意的就是無菌操作!細(xì)菌培養(yǎng)皿
    魏經(jīng)理
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